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PCR Array简介

实时荧光定量PCR是通过在实验过程?#26657;?#23454;时监测荧光染料的信号变化,?#20174;?#26679;?#20998;?#30340;基因表达量的实验方法。因为实时定量PCR线性?#27573;?#24191;因此可以检测同一样?#20998;?#34920;达量极低的基因和表达量很高的基因。对于一般?#31361;?#32780;言,由于实时定量PCR需要同时分析内参基因和目标基因,因此,每?#38382;?#39564;只能检测少数几个基因的表达水平,若要检测大量基因,则需要一定的经验?#20174;?#21270;反应体系、优化引物设?#39057;齲?#24037;作量巨大,耗?#32972;?#20037;。

因此我们公司提供经过优化的实时定量PCR体系,并将引物与反应的PCR板交联,使得研究者自身仅需提供样本,即可以同时方便研究大量基因。这个产品既可以进?#24515;?#20123;特定的信号通路的研究,?#37096;?#20197;作为验证芯片结果的方法,产品具有很好的稳定可靠性。

?#31361;?#23450;制PCR Array

在现在各类研究需求?#26657;?#27599;个研究者对于自己的实验方案有着特殊的要求,有研究者的方案对于某个通?#20998;?#22810;数基因进行检测,也有研究者着重对于多个通?#20998;?#30340;若干个基因进行研究。至于基因通路的组?#32454;?#26102;千差万别,供应商提供的某类产品其实很难满足多数?#31361;?#30340;需求。因此我公司推出?#31361;?#23450;制PCR Array,根据?#31361;?#30340;要求开发定量方案。我公司用多年的经验,有能力根据?#31361;?#30340;经验设计相关基因的引物,并在短时间内完成定量PCR的优化,为?#31361;?#25552;供稳定的多基因检测PCR Array产品。图1为我公司的若干定制PCR Array96孔板排布方式。 

定制PCR Array的产品?#38382;?/span>

?#31361;?#23450;制PCR Array的定制流程

?#31361;?#25552;供需要定制的基因名字和所需采购的产品数量;并提供一个“样本”以方便公司建立实验方案。?#31361;?#25552;供样本是考虑基因表达具有组织特异性,既有表达量的特异性,也有转录?#38382;?#30340;特异性(一个基因有多个转录本,这是剪切调控的结果)。因此?#31361;?#25552;供和自己实验相关的样本,我们设计的引物及优化反应条件更有针对性,更稳定。

我公司第一步进行针对性引物设计,并对反应条件进行优化,将引物在同一个反应条件下都能有效工作。

我公司第二步将引物和PCR反应体系进行产品化,并销售给?#31361;А?span lang=EN-US>

?#31361;?#36827;行实验,简单说,?#31361;?#21482;要将自?#32791;?#36716;录的cDNA和我们提供的SYBR mixture混合后分装至96孔板?#26657;?#28982;后根据我们的?#24471;?#20070;设置PCR程序,等待反应完成后进行数据分析。?#31361;?#21487;?#23381;?#20998;析数据,?#37096;?#20132;由我公司,由我公司协助进行分析。

 

?#31361;?#23454;验流程详解:

1. RNA制备:从样本中抽提RNA,一般要求RNA浓度达到几百纳克,260/2801.8-2.1.

2.cDNA制备:RNA逆转录成cDNA

3.混样及分板:将样本cDNASYBRMixture均匀混合,评分支孔板中。

4.荧光定量PCR根据?#24471;?#20070;设置定量PCR仪的程序,并运?#23567;?#20851;于反应程序优化,因为我公司提供的反应程序有很大的宽容性,所以只要是一般96孔板的实时荧光定量PCR仪都能设置相同的反应条件。

5.数据分析:?#31361;?#21487;?#23381;?#20998;析,?#37096;?#30001;公司协助分析。

 

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