Western blot检测服务
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Western blot检测服务

蛋白质印迹(Western blotting),是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样?#20998;?#30340;某?#20540;?#30333;的方法。该法是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一?#20013;?#30340;免疫生化技术。由于免疫印迹具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白分析的一?#27542;?#35268;技术。免疫印迹常用于鉴定某?#20540;?#30333;,并能对蛋白进行定性和半定量分析。结合化学发光检测,可以同时比较多个样品同?#20540;?#30333;的表达量差异。

 实验内容

1.蛋白提取和定量(如果提供蛋白样品,则直?#25317;?#27891;预实验检测抗体特异性);

2.SDS-PAGE 10-15% 变性聚丙烯酰胺凝胶电泳;

3.转膜(PVDF膜);

4.封闭(5%脱脂奶粉);

5.一抗孵育(其中内参基因为TubulinGAPDHActin);

6.二抗孵育(如果由于材料降解或一抗造成实验无法继续,则收取相关预实验费用);

7.显色(ECL);

8.曝光、洗片、分析。

翼和优势 

l  多年Western Blot检测经验,提供专业的技术服务。高效蛋白提取液进行高质量蛋白的提取,同时高效的蛋白酶抑制剂有效防止蛋白的降解及去磷酸化等作用;

l  提供完整的实验步骤和结果,提供专业的数据分析,以及灰度值分析。

l  为?#31361;?#35774;置预实验,根据?#31361;?#26679;品具体情况摸索最适上样量和抗体最适稀释度。

样品要求

?#31361;?#38656;提供新鲜或正确保存的蛋白样品或者蛋白提取?#28023;?#38451;性对照样品(细胞或组织), 检测目的蛋白的一抗(可由我公司代?#28023;?#26679;品要求为:

1.细胞不少于5×10^6个;

2.组织样品不少于50mg

3.总蛋白浓度不低于 2μg/μl(至少50μl)。

Western Blot细胞蛋白样本的准备及运输

细胞去掉培养?#28023;?#29992;PBS洗一次后,加入少量PBS,用细胞刮将细胞刮下,用1ml?#21038;?#21462;细胞?#23376;?span lang=EN-US>1.5ml EP管?#26657;?#24555;速离心去除上清后,可按下面两种方法运输:

1、细胞沉淀运输:将细胞沉淀放入液氮速?#24120;?span lang=EN-US>-80℃保存如需长途过夜运输,建议干冰运输;如当天送达样本,可用液氮或者-80冰袋运输。

2、细胞裂解液运输:加入一定量的胞裂解液后即可冷藏运输(冰袋或者冰?#26657;?#22914;需检测磷酸化蛋白,建议裂解液中加入终浓度1mMNaFNaF可抑制磷酸?#23500;?#24615;,保护蛋白磷酸化水平。如果加入裂解液后提取蛋白,则置于冰上裂解1 h12000rpm离心10 min后取上清,即为蛋白样本。蛋白样?#31350;?span lang=EN-US>-20度冷藏运输(建议快递寄送用干冰或者足量-80度冰袋),保存需要-80℃。

3、蛋白样本运输:蛋白样本需要经过浓度测定,再进行变性,变性时先加入Sample buffer,再95 10 minSample buffer可防止变性导致的蛋白沉淀析出。变性的蛋白可直接冷藏运输,-20℃稳定保存。

 

? 武里南和全北现代
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