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【喜报】翼和生物细胞鉴定技术论文叕发Cancer Research

一、文献来源:DOI:10.1158/0008-5472.CAN-17-2314,Cancer Research ·March 12, 2018 影响因子8.5

二、蛋白酪氨酸激酶src基因家族:上一篇发在CancerResearch上涉及的表皮生长因子EGFR是受体型酪氨酸激酶,非受体型src基因家族为代表,在癌症发生发展中起重要作用。这篇文章证明了Src与细胞膜的联系与失联、催化激活与失活军受到蛋白?#23460;?#37232;化修饰的调控。

三、蛋白质翻译后修饰

蛋白质翻译后修饰是蛋白质功能调节的重要方式。分为可逆与不可逆两种方式。不可逆的如C端的甲基化,而磷酸化,N端甲基化与乙酰化属于可逆修饰,随细胞生理状态而改变,起到信号传递、酶原激活作用。

图 Src CD-loop区激活与失活位点

正文

模型?#33322;?#36136;瘤

研究手段:

1.细胞鉴定

上海翼和生物帮助作者对文章涉及的HEK293T人源进行了STR鉴定,而后又对NIH3T3, SYF与MEF等细胞系进行了鼠源鉴定

 

2. 主要结果

作者证明了Src从细胞膜下来去其他细胞器或细胞核,是通过CBP蛋白乙酰化Src的N端的?#34507;?#37240;簇。而Src激活STAT3活性的功能是通过刺激C端的?#34507;?#37240;簇。乙酰化的Src明显促进了癌症细胞的增殖。

细胞系鉴定FAQ

 1.什么是细胞系鉴定?

所谓细胞系鉴定即通过STR(短串联重复)图谱所建立细胞系的遗传特征。一株细胞系的遗传特征确立后,细胞系可以通过定期的检测,以防止出现细胞系被误认或交叉污染的情况。 

2.为什么要进行细胞系鉴定?

由于细胞系发生交叉污染或身份误认,将导致实验数据的无效或数据误导。NIH已发出公告,讨论细胞系鉴定的必要性与重要性,并?#20197;?#26469;越多的的期刊要求文章发表前、需提供细胞鉴定数据。 

3. 细胞系用错的概率有多大?

据ATCC估计,1977年错误使用细胞的概率是16%,1999年是18%。根据我们的经验,国内细胞系用错的概率不低于20%。即如果一个研究所有二十个课题组,按概?#20351;?#35745;,有4个课题组用的细胞是错的。

4. 什么细胞最容易污染别的细胞?

       Hela细胞。因为她长得快、长得好嘛。当你发?#32959;?#24049;的一个培养瓶里的细胞突然长得很好,而以后都用它传代做实验的话,十之?#21496;?#26159;搞错了。

 5. 有哪些细胞曾被Hela污染

       lnt-407、HEp-2、WISH等一百余种。.

 6. 如何进行细胞系鉴定

细胞系鉴定目前主要基于国际身份认证委员会的标准。依据该标准,可以通过多重荧光PCR技术,对人源8个STR位点以及1个性别决定位点进行检测。下表为这些位点的具体的遗传信息。

                   

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7. 什么时候需细胞系鉴定

当建立或获得一个新的细胞系时;

一个涉及到细胞试验项目开始/结束时

在细胞冻存之前,或细胞已连续培养2~3个月时

发表文章或申请课题经费前

细胞系表现不稳定或结果与预期差别较大时

当实验室使用超过一种细胞系时,所有细胞系最好先鉴定以排除交叉污染的可能

 

8. 如何提供鉴定样本

每种细胞需单独收集在1.5ml离心管?#26657;?#32454;胞数目不少于 106个。细胞需要离心沉淀,并且以PBS清洗尽可能去除上清培养基,沉淀沉淀进行冰冻保存与寄送。

 

9. 如何知道细胞系是否发生交叉污染了

如果存在细胞系之间发生交叉污染,而且鉴定用的细胞可能有两种以上的细胞系时,那么在进行STR位点检测的时候,多个位点会出现两个以上的峰。峰高值表示该?#20219;?#22522;因的信号强度,理论上峰值与样本的DNA浓度有直接的关系。因此,存在交叉污染的混合细胞系?#26657;?#20854;中一个位点中某些峰会明显高于其他的峰,其中大峰是属于混合细胞系中那个主要细胞系,而小峰则属于那个?#25105;?#32454;胞系。

值得注意的是,当发生两个或以上细胞混合的时候,检测结果看起来非常像细胞系的“遗传不稳定”——当一个细胞系存在亚群时,尤其是一些癌细胞系,由于遗传不稳定的存在,在一些位点的STR特性会不同。因?#21496;?#39564;丰富的分子专家是非常重要的,他能够帮助分析复杂的电泳图谱(STR峰图),从而判断是否由于发生细胞系交叉污染而导致多?#20219;?#22522;因情况。上海翼和应用生物,作为老牌的遗传技术服务公司,十年以上基因分型经验,可?#22253;?#20320;解决你的疑惑。

 

10.如何进行数据库比对

(1).Cell Line Integrated Molecular Authentication (CLIMA)

http://bioinformatics.hsanmartino.it/clima/

(2).American Type Culture Collection (ATCC)

https://www.atcc.org/CulturesandProducts/CellBiology/STRProfileDatabase/tabid/174/Default.asx

(3).Japanese Collection of Research Bioresource (JCRB)

http://cellbank.nibio.go.jp/cellbank_e.html 

(4).German Collection of Microorganisms and Cell Cultures(DSMZ)

http://www.dsmz.de/human_and_animal_cell_lines/main.php?contentleft_id=101

      

11. 如何根据STR数据判断细胞系的身份

收到细胞系鉴定结果以及STR信息,可以与参考数据库进行比对。如果细胞样本的每个STR位点和参考细胞STR位点都能重合匹配,即?#24471;?#35813;细胞系正确,反之则?#24471;?#20320;的细胞系可能被错误标记,交叉污染或发生遗传不稳定。一般说来,匹配度≥80%即可认为该细胞系正确,匹配度<80%则?#24471;?#35813;细胞系的来源需要被怀疑。

如果细胞系被鉴定出发生交叉污染或错误标记,则需要拿更早代数的细胞进行鉴定,从而?#19994;?#38382;题的起源或者直接从可靠的机构购买一株新的细胞系。

 

12. 如果细胞?#24471;?#26377;在数据库中比对出结果怎么办

如果已知数据库中没有?#19994;?#20320;的细胞信息,你可以用自己的细胞遗传信息建立自己的遗传特性,以便后期进行自己细胞库的比对。

 

13. 细胞系交叉污染或错误鉴定对研究是否有影响

答案是肯定的。使用错误的细胞系或者是被污染的细胞系做研究,只会造成时间,金钱和精力的损失,以及造成实验结果的不一致和不可重复。因此如果用被污染或错误的细胞系做研究,在发表文章或做进一步研究时极有可能需要用正确的细胞再重复实验。

 

14. 全球因为细胞系用错浪费了多少钱?

       据不完全统计,仅就HEp-2与Int-407这两株细胞(它们实际上是Hela),直接浪费的?#24230;?#26159;7亿美金,间接浪费了7亿美金。

 

15. 因为用错细胞,产生了多少垃圾文章?

       据不完全统计,仅就HEp-2与Int-407这两株细胞(它们实际上是Hela),前者发表了近6000篇SCI(17万?#25105;?#29992;),后者发表了近1400篇SCI。都是垃圾文章。

 

16. 我觉得我的细胞是正确的,为什么你说是错的呢?

       好吧。瑞典有一个科学家,在三十年的时间里?#23478;?#20026;自己的细胞是正确的,直到做了细胞鉴定之后发现是错误的。越早发现错误?#33014;茫?#37492;定之后是正确的话,自己也放心。

 

17. 翼和为?#38382;?#29992;STR图谱进行人源细胞鉴定?

       翼和的STR图谱鉴定里有细胞身份验证报告、STR?#20219;?#22522;因表、电泳图、结果的解释与数据库比对结果。就这一服务本身而言,是非常专业的。

 

18. 翼和资质

细胞鉴定哪家强,上海翼和应用生物技术有限公司。本公司最多可提供20于对STR引物,对细胞进行鉴定。无论是小鼠、大鼠、人我们都能区分。

翼和资质:上海市遗传学会理事单位、国际细胞系认证委员会成员

关键价格超便宜,为您第一时间鉴定细胞来源

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