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【喜报】上海翼和成功开发端粒长度检测方法

端粒长度检测在衰老疾病和肿瘤中也具有重要诊断价值。其主要机制在于端粒是细胞衰老的分子钟,由于DNA 聚合酶不能完整的复制染色体的末端(DNA 复制问题),细胞每分裂一次,端粒就变短一点。几乎所有的正常人体细胞会随着细胞分裂出现端粒逐渐缩短,并最终引发细胞复制性衰老。此时,极少数细胞获得了端粒?#23500;?#24615;,并且继续分裂转化为肿瘤细胞。多项研究表明,那些细胞中有较短端粒的人更容易患像癌症、心脏病和老年痴呆症(阿尔兹海默症)之类的疾病,甚至会?#26174;?#27515;亡。小鼠实验则表明,延长端粒能够增加寿命的长度。

就目前而言,最常用的端粒长度检测方法包括:端粒末端限制性片段分析(terminalrestriction fragment,TRF),定量PCR(qPCR),荧光原位杂交(fluorescencein situ hybridization,FISH),单链端粒长度分析(singletelomere length analysis,STELA)和基于全基因组测序(WGS)的端粒长度分析。

基础研究通常检测培养的细胞或组织端粒长度,临床研究和流行病学研究通常检测外周血淋巴细胞的端粒长度。如果有大规模的样本需要进行高通量检测,例如流行病研究及临床大样本的端粒长度筛查,qPCR 是比较好的选择,qPCR 用于流行病学研究有简便、经济、高通量,DNA 用量少等优势。世界上最大规模的(10万人)端粒长度检测项目(Lapham et al., 2015),采用的即是qPCR方法。

端粒长度qPCR检测基本原理

为了方便分析端粒长度仅需要唾液DNA 的情况,基于PCR的端粒长度检测方法已经开发,特别上海翼和生物采用的、使用较广泛的是2002年Cawthon研究的qPCR法(已被引用超过2000次)。在扩增过程?#26657;?#20351;用与端粒双链都能退火、但与之存在不匹配碱基的引物,随后通过PCR 扩增端粒,。端粒扩增产物(T)的量与另一管中扩增的单拷贝基因的量(S)进行比值来对端粒长度定量。

端粒长度应用

服务流程

1.样本DNA提取;

2.DNA?#22763;兀?/span>

3.qPCR扩增。

提供结果

根据定量PCR结果,计算出的T/S比值。

样本要求

1、若样品为血液基因组DNA,要求:DNA浓度≥20ng/ul,体积>20ul。纯度OD 260/OD280 在1.8~2.0之间。

2、若分型样品为血样,样本要求:血液样品,体积大于500ul,只能采用EDTA抗凝?#37327;?#20957;,送样过程中请注意保持低温,防止DNA降解。提取DNA将收取DNA提取?#36873;?/span>

3、若为唾液样本,需保存于专用管中。

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